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本产品是专门用于分离血清样本中外泌体的试剂盒，提供了一种简单可靠的方法从血清样本中浓缩完整的外泌体：通过捆绑水分子，迫使较难溶解的组分(即外泌体)离开溶液，经过简单的较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体。本产品与传统的超高速离心相比，样本中的外泌体所受到的压力较小，可以保持较完整的形态；同时提取过程所需要的时间更短、所需要的样本起始量更低、提取效率更高。使用本产品获得的外泌体可适用于多种下游实验，如RNA分析、高通量测序、细胞共培养等。

外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30～150nm)，由不同类型的细胞在培养过程中分泌，在体液(包括血液、唾液、尿液和母乳)中大量存在。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定的细胞之间传递效应物或信号分子。然而，外泌体的形成和组成以及它们所涉及的生物学途径仍不完全清楚。外泌体功能和转运等生物学研究需要分离完整的外泌体。

• 外泌体提取试剂盒(血清)不建议用于血浆外泌体的提取，血浆的外泌体提取请使外泌体提取试剂盒(血浆)。
  
• 提取外泌体后，如需提取RNA和蛋白质，请使用外泌体RNA以及外泌体蛋白质的专用提取试剂盒。
  
• 血液组成成分复杂，对于部分困难样本，如高脂血，提取外泌体及后续处理需根据实际情况进行调整。

• 制备血清
  
  • 将采集好的全血(未加抗凝剂)，37℃静止1h或者2～8℃静置过夜；
    
  • 待血液凝固后，4℃ 3000×g离心5～10分钟，上层的透明黄色液体即为血清，小心转移上清至新的离心管中，注意切勿吸出下面的红细胞成分；
    
  • 收集到的血清可直接用于后续提取外泌体实验或分装后于-80℃冰箱保存。
• 准备样品
  
  • 将血清(新鲜样品或已于25℃水浴解冻好的冷冻样品)冰上放置；
    
  • 4℃，2000×g离心30分钟，去除残留细胞及碎片；
    
  • 将上清转移到新的离心管中(注意不要吸到底部沉淀)，冰上放置至使用。
• 提取外泌体
  
  • 根据实验需求，吸取适量离心后的血清到新的离心管，加入0.2倍体积的提取试剂：
    

    血清体积	加入提取试剂体积
    1mL	0.2mL
    2mL	0.4mL

  • 上下颠倒混匀或者通过移液器吹打混匀，直至成为均一的溶液；
    注：加入提取试剂后，溶液会出现云雾状的浑浊现象。
    
  • 2～8℃孵育30分钟；
    
  • 孵育结束后，4℃，10000×g离心10分钟；
    
  • 用移液器小心吸去上清液，尽量吸取干净。管底的沉淀即为提取的外泌体；
    
  • 可以使用1×PBS或者其他类似的缓冲溶液，通过移液器将沉淀充分吹打混匀；
    

    血清体积	重悬体积
    100μL	25～50μL
    1mL	100～500μL

  • 外泌体沉淀被重悬以后就可以进行下游分析或通过亲合法进一步纯化；
    
  • 将分离得到的外泌体保存在2℃至8℃，最长保存1周，或≤-20℃长期保存。

• 一次实验需要多少体积血清？
  至少0.5mL血清样本。更少的血清体积虽也可以提出外泌体，但产量可能较低，不满足后续实验需求。
  
• 本品提取的外泌体如何应用于下游实验？
  可直接使用下一步实验的试剂处理离心后的沉淀。例如，可直接加入合适裂解液后，用移液器吹打或使用匀浆器重悬沉淀后进入RNA和蛋白提取流程。如需重悬，可用适量1×PBS重悬离心后的沉淀。
  
• 血清外泌体沉淀如何重悬？
  血清提取的外泌体沉淀可使用适量1×PBS或其他下游实验所需试剂进行重悬。沉淀重悬有时会较为困难，若后续实验对外泌体的完整性无要求，可使用低速匀浆器进行重悬。